Delftse onderzoekers rekken grenzen van de lichtmicroscopie op
Het onderzoeksveld van de lichtmicroscopie heeft zich de afgelopen jaren snel
ontwikkeld. Door de uitvinding van een techniek genaamd
superresolutie-fluorescentiemicroscopie kunnen sinds kort zelfs de kleinere
onderdelen van een levende cel in beeld worden gebracht. Met een slimme
aanpassing aan de superresolutie-techniek hebben onderzoekers van de TU Delft
de grenzen van wat mogelijk is nu nog verder opgerekt. Waar eerder objecten van
maximaal 10 tot 20 nanometer in beeld konden worden gebracht, maakt hun methode
het mogelijk om scherp stellen op structuren van maar liefst 3 nanometer.
De zelfgemaakte microscopen van de Delftse lakenhandelaar annex wetenschapper
Antoni van Leeuwenhoek hadden een resolutie van minder dan een micrometer,
waardoor hij onder meer bacteriën en spermacellen kon waarnemen. Van
Leeuwenhoek kwam daarmee al in de zeventiende eeuw in de buurt van de zogeheten
'diffractielimiet', een theoretische grens waarop twee naast elkaar gelegen
punten nog te zien zijn met behulp van een lichtmicroscoop. De diffractielimiet
wordt mede bepaald door de golflengte van het licht. Met een conventionele
lichtmicroscoop zou je volgens de theorie maximaal iets in beeld kunt brengen
dat half zo groot is als de golflengte van het gebruikte licht. Alles wat
kleiner is, kun je volgens de theorie niet scherp krijgen.
Fluorescent
De diffractielimiet leek lange tijd een harde grens te zijn, bepaald door de
natuurwetten. Maar door slimme trucs toe te passen lukte het natuurkundigen
toch om onder de theoretische limiet te duiken. Niet lang geleden, in 2014,
werd de Nobelprijs voor Scheikunde uitgereikt aan de drie onderzoekers die de
'superresolutie-fluorescentiemicroscopie' uitvonden. Bij die techniek worden
bepaalde eiwitten of moleculen met behulp van genetische modificatie
fluorescerend gemaakt. Het zwakke lichtsignaal dat ze uitzenden kan vervolgens
worden opgevangen met behulp van een lichtmicroscoop. 'Het probleem met het
fluorescent maken van eiwitten is alleen dat het in de praktijk niet lukt om
álle eiwitten van een bepaalde soort te labelen, maar maximaal 30 tot 50
procent', vertelt onderzoeker Bernd Rieger. 'Als je vervolgens gaat meten, zie
je een aantal losse, lichtgevende punten, maar niet de volledige structuur die
je in beeld probeert te krijgen.'
[cid:image003.jpg@01D44F46.E7DF8EC0]Om dit probleem op te lossen hebben de
Delftse onderzoekers een aanpassing bedacht op de superresolutie-microscopie
die te vergelijken is met wat in de fotografie 'compositing' wordt genoemd: het
op elkaar stapelen van meerdere foto's om zo een samengesteld beeld te krijgen.
'Het middelen van de informatie van verschillende metingen werd al gedaan in de
elektronenmicroscopie,' vertelt onderzoeker Sjoerd Stallinga. 'Maar dat is een
compleet andere technologie. Het kostte onze promovendus Hamidreza Heydarian
twee jaar om de techniek om te bouwen voor lichtmicroscopie.'
Algoritme
Een probleem was ook dat het veel rekenkracht vergt om de data van honderden,
zo niet duizenden 'opnames' te combineren. Met een normale computer kostte het
een aantal dagen om uit alle data een eenduidig beeld op te bouwen. 'Gelukkig
hebben we dankzij de game-industrie de beschikking over grafische kaarten die
ontzettend goed parallel kunnen rekenen', aldus Rieger. Een programmeur van het
Amsterdamse eScience Center sloot zich bij het project aan en bouwde een
bestaand algoritme voor normale pc's om tot een algoritme waarmee de
onderzoekers op de grafische kaart konden rekenen. Het resultaat is dat de
metingen nu binnen een paar uur tot één beeld kunnen worden gecombineerd.
Het onderzoek brengt de elektronenmicroscopie en de lichtmicroscopie dichter
bij elkaar. Dat is belangrijk omdat beide technieken verschillende inzichten
opleveren en dus complementair zijn, maar qua mogelijkheden nog ver uit elkaar
liggen. 'De beste elektronenmicroscopen zijn 30 tot 50 keer krachtiger dan de
beste lichtmicroscopen', zegt Stallinga. 'Het dichter bij elkaar brengen van de
twee werelden zou kunnen leiden tot nieuwe biologische inzichten.'
Volgens de onderzoekers moet het met hun techniek, die nu het niveau van de 3
nanometer haalt, ook mogelijk zijn om structuren ter grootte van 1 nanometer in
beeld te brengen. Daaronder worden de afmetingen van de fluorescerende labels
een beperkende factor.
De bevindingen van de onderzoekers zijn gepubliceerd in het tijdschrift Nature
Methods.
***
Meer informatie:
"Template-Free 2D Particle Fusion in Localization Microscopy", Hamidreza
Heydarian, Florian Schueder, Maximilian T. Strauss, Ben van Werkhoven,
Mohamadreza Fazel, Keith A. Lidke, Ralf Jungmann, Sjoerd Stallinga en Bernd
Rieger, Nature Methods
DOI: 10.1038/s41592-018-0136-6<https://doi.org/10.1038/s41592-018-0136-6>
Contact:
Bernd Rieger
B.Rieger@xxxxxxxxxx<mailto:B.Rieger@xxxxxxxxxx>
015 27 88574
Jerwin de Graaf (persvoorlichter TU Delft)
J.N.deGraaf@xxxxxxxxxx<mailto:J.N.deGraaf@xxxxxxxxxx>
06 - 42 71 72 27
U ontvangt dit bericht via de PWC-medialijst. U kunt zich afmelden via
www.platformwetenschapscommunicatie.nl<file:///\\www.platformwetenschapscommunicatie.nl>.
Dit bericht is afkomstig van de TU Delft, Communication, Postbus 5, 2600 AA
Delft, www.tudelft.nl<http://www.tudelft.nl/>.